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都正科普 | 实验室-使用流动相的小细节

都正科普 | 实验室-使用流动相的小细节

  • 分类:学术干货
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2019-04-26
  • 访问量:0

都正科普 | 实验室-使用流动相的小细节

  • 分类:学术干货
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流动相含义

液相色谱中用于携带试样以及展开或洗脱组分的液体。

 

 

 

 

流动相的选择

✔ 流动相应不改变填料的任何性质:低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩,从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

 

✔ 纯度:色谱柱的寿命与大量流动相通过有关,特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

 

✔ 必须与检测器匹配:使用UV检测器时,所用流动相在检测波长下应没有吸收,或吸收很小。当使用示差折光检测器时,应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相,以提高灵敏度。

 

✔ 对样品的溶解度要适宜:如果溶解度欠佳,样品会在柱头沉淀,不但影响了纯化分离,且会使柱子效率降低。

 

✔ 样品易于回收:应选用挥发性溶剂。

 

 

配制方法

✔ 高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,水性溶剂也常用于缓冲液,一般来说,溶剂的混合按体积比(V/V)或重量比(W/W)进行。溶液的体积因温度而变化,所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂,但由于操作较麻烦,通常多用体积比混合。

 

✔ 常见的反相液相色谱中,流动相的极性大于固定相的极性,溶质按照疏水性的大小不同进行分离,极性越大或疏水性越小的溶质,与非极性的固定相的结合越弱,相对更容易被洗脱。所以,通过改变流动相的组成,可以有效改变分离的选择性。(目前实验室最常用的反相色谱流动相,通常以水为基础,加入一定量的能与水互溶的有机极性溶剂)

 

 

流动相的级别

✔ 由于液相色谱是一种相对精密程度比较高的仪器,所以流动相的“干净”与否,对于能不能获得准确的数据以及液相的高效运行至关重要。一般要求,液相色谱所用的试剂要使用高纯度的专用试剂,比如说色谱纯试剂。(色谱纯是指专用于色谱分析的标准试剂,其在低波长处的透光率比较好,在色谱条件下只出现指定化合物的峰,不出现杂质峰。

 

 

流动相的过滤、脱气

✔ 由于流动相中任何尘埃或杂质微粒等都会磨损柱塞、密封环、缸体、单向阀等部件,同时,微粒也可能会堵塞泵口、柱头等,使柱压升高、柱效降低。因此要预先除去流动相中的固体微粒,而最常用的方法就是过滤。(通常情况下,采用0.22或0.45微米滤膜进行过滤,)  

 

✔ 除了过滤之外,流动相在使用前必须脱气,以尽可能的除去溶解在流动相中的气体。否则这些气体会使柱填料的性能降低,还能够对检测器的信号产生很大的干扰。(脱气有多种方法,如超声脱气、真空脱气、氮气脱气等。当然,最常见的还是超声脱气)

 

高效液相使用流动相的注意事项

✔ 流动相不能走空,液相色谱一旦开始测样,我们就要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完,也就是要让滤头一直浸没再流动相的液体里。否则就会造成空泵运转,对柱塞、缸体或密封环产生磨损,最终产生漏液,同时,流动相走空对色谱柱的伤害也是巨大,流动相走空时间长的话,色谱柱内长时间地处于没有溶剂的状态,就容易造成内部填料坍塌,导致色谱柱报废。

 

✔ 停泵后清洗系统,液相色谱使用后,一定要及时进行清理。当样品测完之后,流动相,尤其是含有缓冲液的流动相不能保留在液相系统内,尤其是在停泵过夜或更长时间不用的情况下,如果将含有缓冲盐的流动相留在色谱泵内,就可能析出盐的微细晶体,这些晶体将损坏密封环和柱塞等。因此,必须及时灌注液相系统后,再换成合适的溶剂保存。

 

✔ 流动相最好现用现配,在日常使用中,还需要注意的是,流动相最好现用现配。尤其是水相溶剂,必须及时更换。对于水相溶液来说,虽然大都经过了杀菌处理,但是细菌的生命力很顽强,在适当的温度和光照情况下,很快就会活跃起来,不及时更换就会造成小编最近遇到的滤头长毛事故。而有机相,虽然不会发生细菌污染,但是有机相容易发生聚合,瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。

 

 

小结

流动相在使用中还有很多细节需要注意,希望大家在日常试验中多多留意。  

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